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聊一聊平板菌落計(jì)數(shù)法具體指的是什么
更新時(shí)間:2022-08-30 文章更新于2022-08-30 點(diǎn)擊次數(shù):1328次
菌落是指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖而形成的能被肉眼識(shí)別的生長(zhǎng)物,它是由數(shù)以萬(wàn)計(jì)相同的細(xì)菌集合而成。當(dāng)樣品被稀釋到一定程度,與培養(yǎng)基混合,在一定培養(yǎng)條件下,每個(gè)能夠生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌細(xì)胞都可以在平板上形成一個(gè)可見的菌落。
平板菌落計(jì)數(shù)法是指在活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)時(shí).由單個(gè)菌體或聚集成團(tuán)的多個(gè)菌體在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖所形成的集落.稱為菌落形成單位,以其表達(dá)活菌的數(shù)量。菌落形成單位的計(jì)量方式與一般的計(jì)數(shù)方式不同,一般直接在顯微鏡下計(jì)算細(xì)菌數(shù)量會(huì)將活與死的細(xì)菌全部算入,但是CFU只計(jì)算活的細(xì)菌。因此,可將菌液倍比稀釋成不同濃度,每種濃度吸1毫升加到融化溫度達(dá)50度的15毫升營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)中混勻使其凝固,置35度孵育24小時(shí),取出進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),每個(gè)平板菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)得到每毫升中細(xì)菌數(shù)量,取平均值即可得到較準(zhǔn)確的CFU/ml,一般對(duì)平板進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),選擇菌落數(shù)在30到300個(gè)平板為準(zhǔn)。個(gè)單位比“菌落數(shù)”更準(zhǔn)確反映問題的實(shí)質(zhì)。從理論上認(rèn)識(shí),一個(gè)活細(xì)菌可以在條件合適的固體表面上形成一個(gè)菌落,但實(shí)際上遠(yuǎn)非如此。例如,在環(huán)境因素作用下,每一個(gè)細(xì)菌的生活能力各不相同,會(huì)影響其在該條件下形成菌落的能力;又如,吸附于微小顆粒上的2個(gè)以上菌體或粘連在一起的菌團(tuán)可能共同形成一個(gè)菌落等等。致使形成的菌落數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于實(shí)際的活菌數(shù)。因此目前可用菌落形成單位代替以往常用的“菌落數(shù)”單位。
平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞,取一定量的稀釋樣液涂布到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是,由于待測(cè)樣品往往不宜*分散成單個(gè)細(xì)胞,所以,長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可能來(lái)自樣品中的2~3或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果,現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(cfu:colony-forming units),而不以菌落數(shù)來(lái)表示樣品的活菌含量。